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克隆構建是分子生物學研究中最常用到的手段之一,我們提供包括克隆構建及其上下游相關服務的完整解決方案,并將依據目的基因的來源,靈活選擇不同的克隆方法。
RNAi是一種經濟、快捷、高效的特異性抑制基因表達的技術,有助于研究基因在生物模型系統中的作用,是研究基因功能的重要工具。
啟動子續減分析是利用報道基因原理明確啟動子轉錄活性關鍵區域的一種方法。將目的啟動子克隆并插入PGL3報道基因質粒,轉染細胞,檢測其活性,初步確定其啟動子范圍。以全長的目的啟動子報道質粒為基礎,用5’末端序列續減法,構建了多個不同長度的啟動子報道基因質粒。觀察啟動子活性差異,確定表達的核心區。進而用轉錄因子DNA結合位點查找工具Patch及MatInspector對此段序列進行分析,初步確定關鍵的轉錄因子結合位點,并可進行后續的位點突變、EMSA、ChIP實驗進一步明確。
DNA甲基化是表觀遺傳學(Epigenetics)的重要組成部分,是最具特點的表觀遺傳學修飾。CpG二核苷酸5'端的胞嘧啶在DNA甲基化轉移酶(DNMTs)的作用下轉變為5'甲基胞嘧啶。哺乳動物中,CpG序列在基因組中出現的頻率僅有1%,但在基因組的某些區域中,通常位于基因的啟動子區或是第一個外顯子區,CpG序列密度很高,可以達均值的5倍以上,成為鳥嘌呤和胞嘧啶的富集區,即CpG島,只有CpG島的胞嘧啶能夠被甲基化。
基因分型,也就是單核苷酸多態性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)檢測,主要是指在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態性。與其它分子標記相比,SNP分辨率最高也最為豐富,覆蓋基因組范圍大,遺傳上比較穩定,在人類基因組中,估計平均每1000個堿基對就有1個SNP,估計其總數可達300萬個甚至更多,是繼微衛星之后的第三代遺傳標記。
MicroRNA (miRNA):是含有莖環結構的miRNA前體,經過Dicer加工之后的一類非編碼的小RNA分子(~21-23個核苷酸)。miRNA,以及miRISCs(RNA-蛋白質復合物)在動物和植物中廣泛表達。因其具有破壞目的特異性基因的轉錄產物或者誘導翻譯抑制的功能,miRNA被認為在生命活動過程中有重要作用。
通過熒光染料或熒光標記的特異性探針,對PCR產物進行跟蹤,實時在線監控反應過程,結合相應的軟件可以對產物進行分析,計算待測樣品的初始模板在各組樣本間差異。
通過PCR方法從mRNA 水平檢測目的基因表達的方法。